דו"ח מעבדה - אפיון הפלסמיד pUC19, הפקת DNA וטרנספורמציה בחיידקים

מוסד לימוד
סוג העבודה
מקצוע
מילות מפתח , ,
שנת הגשה 2008
מספר מילים 5824

תקציר העבודה

מטרות:
 אפיון פלסמיד pUC19 ע"י חיתוך באנזימי הגבלה והרצתו בג'ל אגרוז.
 אפיון גנוטיפים של זני E.coli שונים ע"י פנוטיפ הגידול שלהם על מצעי גידול שונים.
 הפקת DNA פלסמידי, איפיונו ע"י הרצה בג'ל, טרנספורמציה לתוך חיידקים.
מבוא:
פלסמיד pUC19
הוא נשא המשמש לשיבוט גנים ב- E.coli. הפלסמיד הורכב מלאכותית והוא מכיל חלקים מפלסמיד pBR322 ומבקטריופאז' M13mp19 . זוהי מולקולה קטנה, טבעתית, דו-גדילית, באורך 2686 נוקלאוטידים.
ל-pUC19  מספר תכונות המכשירות אותו להיות נשא יעיל:

1 – הוא בעל מוצא הכפלה משלו, ומסוגל לייצר עותקים רבים אודות למוטציה נקודתית באזור מוצא ההכפלה.

2 – הוא בעל הגן bla שמקודד לאנזים β– לקטמאז. האנזים מפרק טבעת של β – לקטם שמהווה מרכיב בחומר אנטיביוטי אמפיצילין, וכך מקנה עמידות לחומר זה בחיידק.