דו"ח מעבדה בביוטכנולוגיה- קביעת ריכוז חלבון בשיטה ספקטרופוטומטרית בנוכחות ביורט מבוא:
בניסוי שביצענו ניסינו לקבוע ריכוז של חלבון BSA בעזרת ביורט  ובשיטה הספקטרופוטומטרית. ספקטרופוטומטר הינו מכשיר המסוגל לספק אור ולמדוד את עוצמתו באורכי גל שונים, כך שנוכל לדעת מהי רמת בליעת האור של חומר מסוים.
בליעת האור מתרחשת כאשר האור פוגע בחומר מסוים והאנרגיה שלו נספגת בחומר באופן חלקי או מלא.
על פי חוק בר למברט, המקשר בין הבליעה של חומר באורך גל נתון לבין ריכוזו בתמיסה, ניתן להסיק כי יש יחס ישר בין ריכוז החומר לבין רמת בליעתו, ולמצוא את רמת בליעת האור של החומר עי ריכוזו. לחוק זה שתי מגבלות:
–          קיים יחס ישר בין ריכוז החומר לבין רמת בליעתו באורך גל שבו בליעת החומר היא מרבית. –          החוק מתקיים רק בריכוזים נמוכים של המומס ( עד M0.1) , כיוון שבריכוזים גבוהים יותר ייווצרו סטיות כתוצאה מפיזור האור בתמיסות. בדרך זו, על ידי מציאת אורך הגל שבו בליעת האור היא מרבית בחומר מסוים, נוכל בעזרת עקומת כיול לראות את מגמת השינויים ונוכל למצוא את רמת הבליעה על ידי ריכוזו.
כיוון שהחלבון BSA הוא חלבון שקוף ללא צבע כמו רוב החלבונים, הספקטרופוטומטר לא מספיק רגיש על מנת לקבוע את רמת הבליעה של חלבונים שקופים, לכן השתמשנו בבדיקת ביורט. שיטת הביורט מתאימה לבדיקת חלבונים ופפטידים המכילים יותר משתי חומצות אמינו כך שיהיו שני קשרים פפטידים לפחות, מתבססת על צבע שמקורו בקומפלקס שנוצר בין יוני הנחושת Cu++, לבין הקשרים הפפטידים (בסביבה בסיסית). התצמיד נוצר בעקבות משיכה בין יוני הנחושת לבין אטומי החנקן והחמצן בקשרים הפפטידים.
צבע התצמיד הוא סגלגל, ועוצמתו תלויה בריכוז החלבון.
·         השיטה מאפשרת לזהות חלבון בריכוזים 1-10 מ"ג/מ"ל.
בניסוי זה הוספנו ל7 מבחנות ריכוזים שונים של החלבון אלבומין אותו לקחנו מתמיסת האם. הוספנו לכל אחת מהמבחנות מים ומגיב ביורט. קבענו מה יהיה ריכוז החלבון בכל מבחנה ע"י שימוש בנוסחת המיהולים:   C1*V1= C2*V2כאשר C1= ריכוז החלבון מתמיסת האם, C2= ריכוז החלבון בתמיסה המהולה, V1= נפח תמיסת האם, V2= נפח התמיסה המהולה.
לאחר הכנת המבחנות השתמשנו בספקטרופוטומטר.
ספקטרופוטומטר הינו מכשיר המסוגל לספק אור ולמדוד את עוצמתו באורכי גל שונים, כך שנוכל לדעת מהי רמת בליעת האור של חומר מסוים.
בשימוש בשיטה הספקטרופוטומטרית יש להשתמש במבחנת הבלנק. במבחנה זו נמצאים כל החומרים מלבד החומר הנבדק, כך שבחישוב רמת הבליעה של החומר נבדק, –