גנטיקה- דוח מעבדה

תקציר העבודה

העבודה עוסקת בגנטיקה: דוח מעבדה, אפיון פלסמידים, אפיון גנטיפים, הפקת דנ"א, ניסיון טרנספורציה לחיידקים, חיתוך קטע דנ"א, אנזימי הגבלה, אלקטרופורזה בג'ל, סרכוז, צנטריפוגה, תמיסות, ניסויים עוד. עבודת הגשה ממ"ן 15 בקורס גנטיקה 20275- דוח מעבדה הוכנה ע"י סטודנטית לתואר ראשון במדעי החיים, האוניברסיטה הפתוחה- בעלת בגרות 5
יח"ל בכימיה. ציון הממ"ן 100 ממ"ן
1 5- גנטיקה. דוח מעבדות מספר 2 ו-3
נושא המעבדות: אפיון הפלסמיד pUC19. הפקת דנ"א של פלסמיד זה וטרנספורמציה.
מטרות המעבדות:
1.      אפיון הפלסמיד pUC19 על ידי חיתוכו באנזימי הגבלה והרצתו בג'ל אגרוז.
2.      אפיון גנוטיפים של מספר זני E.coli על פי הפנוטיפ שלהם במצעי גידול שונים.
3.      הפקת דנ"א של הפלסמיד pUC19.
4.      ניסיון טרנספורציה לחיידקים על ידי החדרת הפלסמיד לתוך חיידקים שאינם מכילים אותו.
שיטות וחומרים:
שיטות בהן השתמשנו במעבדה:
1. חיתוך קטע דנ"א באמצעות אנזימי הגבלה- שיטה שמשתמשת באנזימים שמזהים רצפים ייחודיים על קטע הדנ"א וחותכים את הדנ"א באזור מוגדר. במעבדה ביצענו חיתוך של הפלסמיד pUC19 עם וללא דנ"א זר באנזימי הגבלה EcoR I ו-Cla I, בדקנו כיצד חיתוכים שונים בפלסמיד משפיעים על הרצת המקטעים בג'ל.

2 . אלקטרופורזה בג'ל- שיטה להפרדה בין מולקולות על פי גודלן באמצעות שדה חשמלי ותווך שמורכב מג'ל שבו המולקולות נעות. במעבדה השתמשנו בג'ל האגרוז, המסנו 0.4 גרם אגרוז עם 50 מ"ל בופר לקבלת ג'ל בריכוז 0.8%. את ג'ל האגרוז יוצקים לתוך תבנית המכילה "מסרק" שיוצר באריות בג'ל כאשר הוא נקרש. לתוך הבאריות מטעינים את דגימות הדנ"א הרצויות ומחברים את הג'ל למכשיר הרצה שבכל קצה שלו ישנה אלקטרודה (חיובית או שלילית). מכשיר ההרצה יוצר שדה שלילי באזור הבאריות. מטענה של מולקולת הדנ"א שלילי ולכן המולקולות ינועו על פי מפל חשמלי מהקוטב השלילי לחיובי. הג'ל מכיל חללים רבים בגדלים שונים ולכן מולקולות קטנות ינועו בקלות רבה יותר ומהר יותר על הג'ל מאשר מולקולות גדולות שינועו לאט-